靶向CD19抗原的CAR-Vδ1T细胞的制备方法及功能鉴定
汪敏1 张萍1 许汉英1 杨林1,2*
该文旨在探讨靶向CD19抗原的CAR-Vδ1T细胞的制备方法, 并评估其在体外及小鼠体内对B细胞起源肿瘤细胞的抗肿瘤作用。借鉴自体嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)技术, 构建靶向CD19抗原的嵌合抗原受体Vδ1T(CD19-CAR-Vδ1T)细胞。用人工抗原呈递细胞(aAPC)体外制备CD19-CAR-Vδ1T细胞。运用Annexin V/7-AAD法、流式微球阵列(CBA)法, 分别检测CD19-CAR-Vδ1T细胞对CD19抗原阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用及杀伤后CD19-CAR-Vδ1T细胞抗炎细胞因子分泌水平。通过流式细胞术对其杀伤、抗炎细胞因子分泌作用进行验证; 并进行荷瘤免疫缺陷小鼠体内药效及毒性实验验证, 通过定期对荷瘤免疫缺陷小鼠进行活体成像、体质量监测及生存期观察, 评估CD19-CAR-Vδ1T细胞对荷瘤免疫缺陷小鼠的体内药效及安全性。扩增结果显示: 用aAPC在体外能成功制备CD19-CAR-Vδ1T细胞, Vδ1T细胞平均扩增倍数大于10 000倍。体外杀伤结果表明: 相较于对照组, CD19-CAR-Vδ1T细胞对CD19抗原阳性肿瘤细胞表现出显著的特异性杀伤能力及持久的体外抗肿瘤活性; 体外抗炎细胞因子分泌结果表明: 相较于对照组, CD19-CAR-Vδ1T细胞针对CD19阳性肿瘤细胞具有显著的抗原特异性细胞因子分泌能力。荷瘤免疫缺陷小鼠体内药效及毒性实验结果表明: 相较于对照组, CD19-CAR-Vδ1T细胞治疗不仅显著延长了荷瘤小鼠的生存期, 且表现出了良好的安全性。总之, CD19-CAR-Vδ1T细胞具备对B细胞起源肿瘤的治疗潜力。
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