健康人血浆EVs与非EVs组分完整RNA的定量分布研究
甘馨怡 林欣仪* 肖旭煌 郭嘉慧 崔毅峙 王通*
该研究旨在利用优化后的二分式尺寸排阻色谱(dSEC)技术实现血浆中细胞外囊泡(EVs)与非EVs组分的高效、高纯度分离, 再利用二代测序技术系统绘制健康人血浆中EVs与非EVs组分的高完整RNA分布图谱, 揭示两类组分中高完整RNA的分布特征与规律。该研究采用dSEC法分离血浆EVs与非EVs组分, 依据MISEV2023指南, 结合纳米颗粒示踪分析、免疫印迹及透射电镜技术对分离组分进行系统表征; 通过下一代测序开展转录组分析, 以原始counts>10为标准进行RNA定量, 以测序覆盖度>95%为阈值筛选高完整RNA, 系统比较两类组分中RNA的组成、完整性及高完整RNA的分布差异。结果显示, dSEC法可高效分离获得高纯度血浆EVs, 其颗粒−蛋白比显著高于非EVs组分, 且分离所得EVs符合MISEV2023标准; EVs与非EVs组分中分别鉴定出31 284个和39 224个稳定定量RNA, 两类组分共有的稳定定量RNA为29 108个; 两组分均以长链非编码RNA(lncRNA)和编码蛋白RNA为主要RNA类型, 且约99%的该类长链RNA呈片段化形式存在, 在编码RNA、lncRNA、假基因及miRNA等主要RNA生物类型的高完整RNA数量分布上, 两组分无显著差异; 全长RNY4是唯一在EVs组分中高丰度稳定表达(TPM均值为2 019.55)且在非EVs组分中完全未被检出的RNA分子。综上所述, 该研究系统揭示了健康人血浆EVs与非EVs组分中高完整RNA的分布规律, 明确了两类组分的RNA组成及完整性特征, 同时发现了全长RNY4在血浆EVs中具有特异性的全长表达特征。该研究为深入理解血浆RNA在EVs与非EVs载体中的分布特征提供了新的实验数据, 也为EVs RNA的相关研究及液体活检检测体系的标准化奠定了基础。
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