印苦楝内酯诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其机制研究
谭静 杨梦楠 李晴 戴克胜* 闫荣*
该研究旨在探讨印苦楝内酯对急性早幼粒细胞白血病细胞的作用及其机制。通过CTD、TargetNet、SwissTargetPredict及PharmMapper数据库挖掘印苦楝内酯作用靶点; 从GeneCards、MalaCards及Open Targets数据库获取急性早幼粒细胞白血病相关靶点。筛选二者的交集靶点并对交集靶点进行KEGG通路富集分析。基于交集靶点构建蛋白互作网络并进行拓扑分析, 以筛选核心靶点。构建药物–疾病–靶点–通路调控网络。用不同浓度的印苦楝内酯处理NB4细胞, CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期分布情况、凋亡率及线粒体膜电位水平; Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及PI3K-Akt信号通路相关蛋白的表达水平。同时, 评估印苦楝内酯对健康人外周血单个核细胞凋亡的影响。在回复实验中, NB4细胞经Akt激活剂SC79预处理后, 与印苦楝内酯共孵育, 流式细胞术检测细胞凋亡率与线粒体膜电位水平; Western blot检测凋亡相关蛋白表达水平。共获得225个急性早幼粒细胞白血病与印苦楝内酯的交集靶点; KEGG富集分析显示, 交集靶点显著富集于细胞凋亡、PI3KAkt信号通路; 蛋白互作网络分析筛选出Caspase-3、Bcl-2和PARP1等32个核心靶点。印苦楝内酯抑制NB4细胞增殖并诱导其周期阻滞在G2/M期。随着印苦楝内酯浓度增加, NB4细胞凋亡率升高并伴随线粒体膜电位水平下降。经印苦楝内酯处理后, NB4细胞中Cleaved Caspase-3及Cleaved PARP1蛋白表达水平上调, Caspase-3、PARP1及Bcl-2蛋白表达水平下调, Bax蛋白表达水平无明显变化。但是, 在相同浓度处理下, 印苦楝内酯不引起健康人外周血单个核细胞凋亡率增加。印苦楝内酯处理使NB4细胞中Akt(Ser473)磷酸化蛋白表达水平下调。Akt激活剂SC79可显著抑制印苦楝内酯诱导的NB4细胞凋亡率升高、线粒体膜电位水平下降以及凋亡相关蛋白变化。总之, 印苦楝内酯通过线粒体途径诱导急性早幼粒细胞白血病细胞NB4凋亡, 其机制与抑制PI3K-Akt信号通路有关。
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